Главная » Что это » Анализ на качественный гепатит с что это такое

Анализ на качественный гепатит с что это такое


Качественный и количественный анализ ПЦР на гепатит С: отрицательный, положительный, расшифровка

Гепатит С — вирусное заболевание печени, вызываемое флавивирусом HCV (от англ. hepatitis C virus), в структуре которого содержится молекула рибонуклеиновой кислоты (РНК). РНК несет генетический код вируса. Ее наличие позволяет проводить анализ ПЦР на гепатит С.

Опасность HCV для человека заключается и в том, что так называемое серологическое окно (промежуток времени между заражением и появлением реакции со стороны иммунной системы) может быть достаточно длительным — от нескольких недель до шести месяцев.

Это не дает обнаружить инфицирование и начать лечение вовремя.

В зависимости от индивидуальных особенностей организма носителя HCV может проявляться в острой форме, а также протекать как хроническое заболевание, которое потребует длительного и дорогостоящего лечения. При выявлении антител к HCV проводится ряд лабораторных анализов, в том числе ПЦР на гепатит С. Этот тест делается всем людям, в чьей крови были найдены антитела к HCV.

Что такое анализ ПЦР?

Лабораторный анализ ПЦР на гепатит С — исследование биологического материала с целью выявить наличие флававируса.

Полимеразная цепная реакция (так расшифровывается аббревиатура) показывает количественное значение вирусного поражения организма, его качественные характеристики, а также генотип вируса, содержащего РНК.

На их основе, а также на базе дополнительных анализов определяется способ и длительность терапии, а также эпидемиологический фактор (степень риска передачи другому носителю).

Что такое РНК-анализ на гепатит С?

ПЦР гепатита С еще называют РНК-анализом (HCV RNA), т.к. флававирус содержит в себе частицу РНК размером вириона 30-60 нм. Одной из особенностей этого микроорганизма является высокая склонность к мутациям.

Каждый из подвидов (генотипов) вируса имеет различную резистентность, что обуславливает разные методики лечения и характер дальнейшего прогноза для пациента.

Биологический материал (венозная кровь) сдается натощак и, как правило, тестируется методом Real-Time PCR (высокочувствительной диагностики в режиме реального времени с нижним лимитом определения 15 МЕ/мл с применением закрытых автоматизированных систем).

Существуют другие тесты, например COBAS AMPLICOR с сенситивностью 50-100 МЕ/мл. Для любого лабораторного исследования важен порог чувствительности, т.е. способности реагента выявить минимальную концентрацию вируса в биологическом материале.

Референсное значение теста (нормальные показатели) — «не найдено».

Виды анализа на гепатит С методом ПЦР

ПЦР на гепатит С включает в себя три важных составляющих:

  • качественный анализ;
  • количественный анализ;
  • генотипирование.

Эти тесты позволяют определить характер виремии, а также генетические признаки возбудителя. В зависимости от чувствительности диагностической системы, исследование проводится один раз, и иногда для подтверждения или уточнения результатов делается повторный тест с более чувствительным реагентом.

Качественный ПЦР гепатита С

Анализ ПЦР на гепатит С качественный — это другое общее название анализа полимеразной цепной реакции. Стандартная чувствительность теста, позволяющего выявить наличие вирусного поражения, находится в пределах 10-500 МЕ/мл.

Негативный анализ ПЦР на гепатит С показывает, что концентрация вируса в крови пациента находится ниже порога восприимчивости диагностической системы.

Если качественный ПЦР дал ответ «не обнаружено», то для последующего лечения важно узнать порог чувствительности реагента.

Положительный ответ на ПЦР анализ на гепатит С может быть дан уже на 4-5 сутки после заражения HCV.

Белковые фракции к флававирусу появляются значительно позже.

Количественный ПЦР гепатита С

ПЦР гепатит С количественный — это показатель вирусной нагрузки, который отображает уровень концентрации РНК флававируса в организме. Это показатель, отображающий, сколько фрагментов вирусной РНК содержится на один кубический сантиметр крови. Результаты ПЦР РНК гепатита С количественного теста в общепринятой системе обозначаются в международных единицах на миллилитр (МЕ/мл) и могут записываться разными способами, например — 1,7 млн или 1.700.000 МЕ/мл.

Количественная ПЦР диагностика гепатита С назначается пациентам перед началом противовирусной терапии, и на 12 неделе лечения, чтобы оценить результаты выбранного метода борьбы с HCV. Вирусная нагрузка позволяет определить три важных показателя заболевания:

  • инфекционность, т.е. степень риска передачи вируса от одного носителя к другому (чем выше концентрация РНК флававируса, тем выше вероятность заразить другого человека, например, при половом контакте);
  • метод и эффективность лечения;
  • длительность и прогноз противовирусной терапии (чем выше вирусная нагрузка, тем дольше длится лечение).

Количественная ПЦР диагностика гепатита С зависит от типа лабораторного теста и порога его чувствительности. Нижней границей нормы принято считать показатель до 600.000 МЕ/мл, среднее значение находится в пределах 600.000-700.000 МЕ/мл. Результаты от 800.000 МЕ/мл и выше считаются высоким уровнем концентрации РНК-содержащего вируса.

Важно: нет прямой связи между уровнем HCV RNA в крови и тяжестью заболевания. У больного может быть очень высокая вирусная нагрузка, но это еще не свидетельствует о том, что имеется серьезное поражение клеток печени.

Генотипирование

Ввиду высокой мутационной активности HCV в природе при тестировании важно выявить, какой именно генотип вируса находится в крови пациента. Всего на планете зафиксировано 11 генотипов вируса гепатита С, в которые входят множество подвидов (субтипов). На территории РФ распространены 1,2 и 3.

ПЦР РНК гепатита С вместе с генотипированием — очень важная составляющая анализа, т.к. позволяет врачу определить резистентность (устойчивость) вируса, подобрать подходящие препараты и назначить курс лечения.

Разные генотипы HCV по-разному поддаются противовирусной терапии. Например, 1 генотип требует до 48 недель лечения, а его эффективность в среднем составляет 60%, тогда как 2 и 3 генотипы лечатся в два раза быстрее с эффективностью до 85%.

Генотипирование также позволяет и косвенно определить состояние печени. Например, 3 генотип HCV нередко сопровождается стеатозом, при котором в клетках органа накапливается жир.

Анализ крови на ПЦР при гепатите С должен выдать цифру, определяющую генотип. В лабораторных ответах может быть написано «не типируется» — и это значит, что в крови человека находится вирус, не определяемый тестовой системой. Это может говорить о том, что генотип нехарактерен для данной географической зоны. В этом случае следует повторно сдать анализ с более высокой чувствительностью системы диагностирования.

Расшифровка анализа ПЦР на гепатит С

Тест на гепатит С ПЦР количественный расшифровать можно на основе приведенных выше данных. При получении результатов лабораторных анализов обычно пишутся следующие данные:

  • «найдено»/ «не найдено» (ПЦР качественный на гепатит С);
  • количество РНК-содержащих фракций, например 831.680 ME/мл (анализ на ПЦР количественный);
  • цифра, определяющая генотип HCV, например — 1, 2, 3, 4;
  • название теста — чаще всего Real-time.

Наиболее важным при расшифровке анализа ПЦР на гепатит С считается второй пункт, который показывает вирусную нагрузку, определяющую прогноз, способ и длительность лечения.

Важно: в результате теста рядом с цифрой, показывающей генотип, может стоять латинская буква, например, 1а, что обозначает субтип вируса. Для врача он не имеет значения: для выбора метода лечения берется только генотип.

Если ПЦР анализ на гепатит С отрицательный, а ИФА положительный — что это значит?

Для расшифровки лабораторных анализов важно обратиться к гепатологу или инфекционисту, который разъяснит полученную информацию в соответствии с видом диагностической системы и порогом ее чувствительности. В медицинской практике существует множество данных анализов крови, которые могут ввести человека без медицинского образования в заблуждение.

Например, если тест на гепатит С ПЦР отрицательный, а ИФА положительный, то может обозначать, что в данный момент в крови пациента нет HCV, но ранее он перенес острую форму гепатита С. Принято считать, что позитивный иммуноферментный анализ (ИФА) показывает, что в крови есть антитела, выработанные после вторжения вируса в прошлом. Но в современной медицинской практике ИФА анализ считается недостаточно надежным и нередко дает нетипичные результаты, поэтому врачи используют его в качестве первичного скрининга. При диагностике заболевания специалисты ориентируются именно на ПЦР тесты.

Полезное видео

В следующем видео очень подробно и интересно рассказывается, в чем суть метода ПЦР, как проводится анализ:

Заключение

Для анализа на ПЦР гепатита С обычно берется венозная кровь. Чаще всего происходит двойной забор биологического материала — для ИФА, и непосредственно для ПЦР теста. Для корректных результатов тестов требуется соблюдение основных правил лабораторного забора биологического материала:

  • кровь на анализ сдается в первой половине дня натощак;
  • между приемом пищи и забором крови должно пройти не менее 8 часов;
  • перед сдачей анализа нужно также исключить алкоголь и жареную пищу;
  • в течение суток перед сдачей крови необходимо избегать высоких физических нагрузок.

Результаты тестирования крови обычно готовы на следующий день.

Анализ ПЦР на гепатит С качественный: расшифровка результатов

РНК-вирус проникает в клетки печени и вызывает болезнь – гепатит С. Заболевание проходит в острой и хронической форме. Для него характерно протекание без видимых признаков. Такое течение объясняется высокой способностью вируса к мутации и появлению различных видов. Это помогает патогену приспосабливаться к организму хозяина и ускользать от иммунной защиты.

Исследования на ранних стадиях развития не дает результата. Качественный анализ ПЦР на гепатит С проводят, чтобы выявить патоген, и начать вовремя лечение.

Что такое качественный анализ на гепатит С?

Гепатит С – серьезное заболевание, при хроническом развитии которого возникает цирроз и рак печени. Ученые длительное время не могут разработать вакцину от болезни, несмотря на изучение особенностей строения HCV. Многообразие видов патогена слабо поддается изучению.

Только с помощью лабораторных исследований можно обнаружить поражение органа, и предупредить инфицирование окружающих. С этой целью проводят качественный анализ ПЦР на гепатит С.

Носитель в течение многих лет может быть инфицирован и не подозревать о болезни. Качественный анализ предполагает проведение в лаборатории полимеразной цепной реакции крови пациента на наличие РНК вируса. Диагностика проводится на сверхчувствительном медицинском оборудовании, которое помогает его обнаружить.

Что показывает качественный анализ?

Качественное обследование с помощью ПЦР обладает достоинствами перед другими методами:

  • даннй метод помогает выявить генетический материал патогена на ранних стадиях;
  • показывает вид возбудителя;
  • используется система тестов, нет необходимости высеивать материал в питательной среде;
  • обладает высокой скоростью диагностики возбудителя: результат анализа будет готов через 5 часов;
  • выявляет скрытую инфекцию.

Качественный анализ назначают при профилактическом осмотре, когда имеются показания на его проведение. Он проводится во время лечения, после выздоровления. С его помощью подтверждают наличие или отсутствие антител вируса гепатита С в крови.

ПЦР исследует:

  • количественное содержание генотипа HCV;
  • качественные характеристики вирусной РНК;
  • генотипирование.

Диагностику проводят повторно для подтверждения результата с более чувствительным реагентом.

Показания к исследованию

Для проведения качественной ПЦР нужны предпосылки для ее назначения:

  • сексуальная связь с лицом, который инфицирован вирусом гепатита;
  • цирроз печени;
  • обязательное обследование перед оперативным вмешательством;
  • проведение вакцинации против вируса гепатита В;
  • плановое обследование работников медицинских учреждений, садов, школ.

Если у пациента видны явные признаки гепатита:

  • желтизна кожных покровов, белков глаз;
  • боль в правом подреберье;
  • усталость;
  • увеличение в размерах печени;
  • тошнота.

Вирус гепатита С проникает в клетки печени через кровеносные сосуды. Патоген может попасть при гемодиализе, при пользовании инфицированной иглой, при нанесении татуировки, в стоматологических и косметических кабинетах.

Возможна передача вируса новорожденному от инфицированной матери, если происходит травмирование кожи ребенка при родах. Качественный анализ выявляет вирус и указывает на второстепенные признаки: наличие в крови больного антител.

Это интересно:  Гепатит С: пути передачи вируса от человека человеку

Расшифровка результатов

Врач-гепатолог или инфекционист проводит расшифровку результатов ПЦР и ИФА на гепатит С. Полученные данные подтверждаются комплексным обследованием:

  • биохимическим анализом;
  • УЗИ органа;
  • биопсией печеночных тканей.

Опираясь на полученные данные, врач подтверждает или отрицает гепатит С.

Стандартная чувствительность теста на ПЦР колеблется в пределах 10-500 МЕ/мл. Анализ не дает результата, если она ниже указанного параметра.

Количественный анализ ПЦР показывает вирусную нагрузку: концентрацию патогена в человеческом организме (сколько фрагментов флававируса в 1 мл крови). Такой метод обследования назначают перед началом комплексной терапии и на 12 неделе заболевания. Он помогает:

  1. Выявить степень болезни. Если концентрация вируса в крови пациента высокая, возможна передача инфекции другим лицам.
  2. Назначить противовирусную терапию, выбрать нужный метод лечения.
  3. Сделать прогноз выздоравления.

Важно определить генотип, так как патоген постоянно мутирует и приспосабливается к организму. Известно 11 типов, на территории РФ выявлены три: 1, 2, 3. Обследование покажет тип вирусной инфекции.

При расшифровке пишут:

  • РНК обнаружено;
  • РНК не обнаружено (болезнь не выявлена);
  • тип флававируса;
  • количественный состав (концентрацию в крови);
  • название теста.

РНК обнаружено

Если гепатит С обнаружен в биологическом материале пациента, врач назначает повторное исследование, чтобы исключить ошибку. Обследование биоматериала делают от 1 до 5 дней. Срок исполнения зависит от загруженности персонала.

Присутствие флававируса и антител к нему свидетельствует о продолжительном течении болезни, которая перешла в хроническую стадию. Ложные показания бывают у беременных женщин и у людей, имеющих другие инфекционные заболевания.

Это интересно:  Правильное питание при гепатите С: что можно и нельзя есть

РНК не обнаружено

Качественный анализ не обнаружил гепатит С. Отрицательное значение означает, что в крови отсутствуют РНК вируса. Утомляемость и другие признаки возможно связаны с протеканием другой инфекции в организме и требуют дальнейшего изучения.

Что делать, если РНК вируса гепатита С обнаружено?

Если вирус обнаружен в крови, нельзя отчаиваться и впадать в панику. В 20 процентах болезнь излечивается самостоятельно. Антитела не всегда свидетельствует о том, что вы болеете гепатитом С. Случаются ошибки при лабораторных исследованиях. Доброкачественные и злокачественные опухоли, инфекционные очаги в организме, проведенная ранее вакцинация смазывают картину ПЦР.

Раннее обнаружение помогает вовремя остановить болезнь. Назначают противовирусную терапию. Препараты помогают вылечить хроническое заболевание в течение 3-6 месяцев.

Качественный и количественный анализ на гепатит С

Метод ПЦР включает два основных способа исследования биологического материала на поиск вируса гепатита С:

  • качественный;
  • количественный.

Эти исследования имеют различные задачи.

Качественный анализ на гепатит с расшифровкой подтверждает наличие вируса после того как в крови уже найдены антитела к этому заболеванию. Если исследование дало положительный результат, значит, болезнь обнаружена.

Иными словами, человек инфицирован. Если получен отрицательный результат, это означает, что человек не инфицирован, либо в наличии слишком маленькая концентрация вируса.

Эта концентрация не обнаруживается таким способом.

Помимо этого клиническая картина заболевания строится на основании маркеров гепатита С и расшифровки анализа. Основные маркеры — иммуноглобулины (антитела) M и G. Наличие их в крови пациента указывает на нехарактерный процесс для здорового организма. На основании наличия этих антител больному, как правило, устанавливается первичный диагноз.

Количественный анализ назначается при первичном обнаружении антител и при необходимости проведения лечения.

Также количественный анализ на гепатит С назначают при выявлении микст-гепатитов (заражение сразу несколькими вирусами).

Количественный анализ с расшифровкой проводится с целью:

  • прояснения окончательного диагноза;
  • выстраивания прогнозов относительно течения заболевания и его лечения — продление, сокращение лечения либо изменение тактики;
  • мониторинга терапии.

Чтобы результаты были верными, нужно соблюдать установленный режим перед тем как сдавать кровь:

  • прийти в лабораторию натощак, последний раз принять пищу можно за 8 часов до процедуры;
  • за два дня до исследования запрещен алкоголь, жирные и жареные продукты;
  • ультразвуковые исследования, массаж, физиотерапию перед исследованием проводить нельзя;
  • за день запрещен прием лекарств, если прием отдельных препаратов невозможно отменить, об этом сообщается до забора крови;
  • перед процедурой рекомендуется снизить по возможности физические и нервные нагрузки.

Выполнение этих требований будет залогом получения верных результатов количественного анализа на гепатит С.

Виды ПЦР исследований

Анализ методом полимеразной цепной реакции имеет определенные преимущества:

  1. При таком исследовании проводится определение самого вируса, а не продуктов его жизнедеятельности. При этом существует возможность определить вид возбудителя.
  2. Методика обладает высокой специфичностью благодаря тому, что исследуется только определенный участок ДНК, уменьшается вероятность получения ошибочных результатов.
  3. Имеет очень высокую чувствительность, определяется даже минимальное количество вируса в крови.

Существует два основных метода исследования крови на гепатит С при помощи ПЦР: качественный и количественный анализ ПЦР. Качественный метод используется для определения факта наличия вируса.

Всем у кого в крови были обнаружены антитела к гепатиту, проводится такой анализ. Результат может быть только двух типов: «обнаружено» и «не обнаружено», последнее значение считается нормой.

Положительный результат теста означает, что в образце были найдены фрагменты РНК вируса, что, в свою очередь, говорит о том, что человек был инфицирован гепатитом. В случае негативного результата возможны два варианта: инфицирования не было или его концентрация настолько мала, что не обнаруживается данной методикой.

Количественный метод отличается по сути исследования, по его задачам и по показаниям. Не все больные гепатитом проходят такой анализ. У него, как и у любого другого, существуют определенные цели. Определение вирусной нагрузки или количественный анализ ПЦР на РНК вируса используется:

  • для определения РНК вируса в крови и постановки диагноза «вирусный гепатит»;
  • для прогнозирования хронизации гепатита и течения болезни;
  • для мониторинга противовирусного лечения и принятия решения о его продлении, сокращении или об изменении тактики лечения.

Исследование проводится при наличии таких показаний:

  • гепатит С обнаружен при качественном исследовании и в крови обнаружены антитела;
  • при микст-гепатитах;
  • если планируется проведение противовирусной терапии;
  • во время и после лечения от гепатита С;
  • при наличии хронического и острого гепатита С.

Тест проводится для оценки количества единиц вируса в заданном объеме образца крови 1 см³ или 1 мл. Результаты приводятся в цифрах.

Показатели используются: МЕ/мл, что означает международная единица на миллилитр и копии на мл, количество копий РНК в 1 мл образца. Чем выше количественный показатель анализа, тем большая вероятность передачи вируса другому человеку.

Р-ДНК — метод разветвленной ДНК. Более простой и недорогой метод. Используется для большего количества образцов, имеет невысокую чувствительность, от 500 МЕ/мл. При такой чувствительности есть вероятность не определить вирус, даже если он присутствует в крови.

ТМА — метод транскрипционной амплификации. Такая методика обнаруживает в крови нуклеиновые кислоты. Имеет невысокую стоимость и при этом высокую чувствительность, от 5–10 МЕ/мл. Относительно новая методика, позволяющая ускорить и удешевить процесс тестирования.

Числовое значение количества вируса, МЕ/мл Расшифровка результатов
Не обнаружено Норма для здоровых людей. Значение вируса ниже предела чувствительности метода или он отсутствует вовсе.
До 1.8*10^2 Концентрация ниже линейного диапазона.
До 8*10^5 Вирус в крови обнаружен. Вирусная нагрузка низкая.
Больше 8*10^5 Вирус обнаружен. Вирусная нагрузка высокая.
Больше 2,4*10^7 Вирус обнаружен. Виремия высокая, выше линейного диапазона.

Результаты количественного анализа могут подаваться как в единицах МЕ/мл, так и в копиях на мл. При этом коэффициент перевода обычно отличается для разных лабораторий и методик. Его значения колеблются в пределах от одного до пяти, принято считать, что в среднем 1 МЕ — это 4 копии на мл.

Метод Коэффициент пересчета, копий на мл в 1 МЕ
Amplicor HCV Monitor v.2.0 (руч.) 0.9
HCV Monitor v2.0 (полуавт.) 2.7
Versant HCV RNA 3.0 5.2
LCx HCV RNA 3.8
SuperQuant 3.4

Лабораторный анализ на гепатит подразумевает исследование биологического материала на предмет наличия или отсутствия вируса у конкретного человека.

ПЦР качественный позволяет определить наличие вирусного поражения, находящегося в пределах от 10 до 500 МЕ/мл. Негативный ПЦР свидетельствует о том, что концентрация вируса в крови человека ниже уровня восприимчивости диагностической системы. Анализ на гепатит В и С может проводиться уже на 4–5 день с момента попадания вируса в кровь человека.

Вирус обладает высокой мутационной активностью, именно поэтому в процессе выявления заболевания необходимо зафиксировать, какой именно генотип находится в крови у больного человека.

Для этого проводится РНК гепатита С. На данный момент во всем мире официально зарегистрировано 11 разновидностей вируса гепатита С.

На территории РФ чаще всего встречаются 1, 2 или 3 тип.

Определение РНК вируса — это одна из наиболее важных частей всего лабораторного исследования. Именно от результатов генотипирования зависит вид терапии, которая будет назначена врачом, а также время лечения.

Для 2 и 3 генотипа достаточно 20-дневной интенсивной терапии, лечение 1 генотипа может длиться в среднем 50 дней. Дополнительно в процессе генотипирования определяется состояние, в котором находится печень человека, так как гепатит в первую очередь поражает именно этот орган.

ПЦР (полимеразная цепная реакция) — это наиболее современный и действенный метод изучения гена вируса и его возможностей. Такая диагностика способна установить разновидность заболевания и определить его дальнейшую мутацию в организме больного.

Анализ проводится путем забора крови, которую в последующем помещают в специальные реактивы, в которых происходит клонирование клеток.

Из одной клетки получается две, и так далее. В итоге появляются сотни ДНК, благодаря которым можно диагностировать возбудитель и выявить вирус на ранней стадии.

Поэтому ПЦР делится на несколько видов:

  • качественный анализ — распознает гены инфекция в крови. Если при проведении качественного анализа у пациента подтверждается заболевание, то следует провести количественный анализ, устанавливающий степень инфекции. В результате проведения данной диагностики специалисты пишут “обнаружено/ не обнаружено”. “Обнаружено” — говорит о том, что недуг присутствует в организме и выявлен уже его РНК. “Не обнаружено” — свидетельствует об отсутствии в пробе гена вируса, то есть РНК гепатита отсутствует. Но врачи рекомендуют провести повторное исследование через 10 дней.
  • количественный анализ — определяет объем генетического материала инфекции в крови. Такая диагностика помогает  установить тяжесть болезни и всю клиническую историю. В результате такого анализа может быть написано только: “Положительно/Отрицательно/Недействительный”. “Положительно” — изображает инфекционную нагрузку. Доктора такой метод диагностики болезни назначают для определения действенности проводимого лечения на 4, 12, 16 и 24 неделях болезни.Если показатель вируса находится в диапазоне 8х10т МЕ/мл, то лечение эффективно, если показатели выше — то нет. “Отрицательно” — ген инфекции не обнаружен. “Недействительный” — такое бывает, если ген вируса обнаружили при качественном, но при этом не выявили при количественном анализе. Встречается подобное при условии, что объем инфекции ниже уровня.

Медиками проводится два вида ПЦР-исследований крови:

  • качественный анализ
  • и количественный

А также отдельно стоит подчеркнуть возможность выделения генотипа, поступившего в кровь вируса.

Качественный анализ

Метод качественного исследования назначается с целью обнаружения вируса в крови, поэтому результат анализа может быть только в двух вариациях:

  1. обнаружено
  2. или не обнаружено.

Результат «Не обнаружено» является нормой. Однако возможен ложноотрицательный ответ, что связано с крайне малым количеством вируса в крови.

Но если качественный анализ имеет результат «Обнаружено», такое заключение указывает на наличие возбудителей болезни в крови обратившегося.

Количественный анализ

Количественный анализ ПРЦ служит для определения концентрации вируса в крови или, иными словами, вирусную нагрузку на организм. Анализ позволяет узнать количество вирусов на единицу взятой у больного крови, определить степень виремии.

В свою очередь, виремия – это состояние, определяемое в медицине, когда вирусы попали в ток крови и распространяются по всему организму. Также результат количественного анализа позволит судить о заразности больного.

Расшифровывается результат количественного анализа следующим образом. В результате анализа указаны цифры, это – количественный показатель вирусной нагрузки.

Для выражения концентрации вирусов используется исчисление в МЕ (международная единица) на мл, либо количество копий на мл. Наиболее часто используется шифрование в МЕ.

Как правило, 1 МЕ/мл сравнимо с 4 копиями/мл.

Соответственно, по объему обнаруженных вирусов можно судить о тяжести заболевания.

Расшифровка цифрового обозначения количественного анализа на гепатит С
до 1,8*102 МЕ/мл (7,5*102 копий/мл) значение вирусной нагрузки ниже линейного диапазона, это означает, что выполняемый анализ ПРЦ не в состоянии обнаружить искомый ген возбудителя гепатита, однако же, вирус в крови найден, но в очень малой концентрации
до 4*106 МЕ/мл или 4000000 МЕ/мл (2*106 копий/мл) низкая вирусная нагрузка, значение виремии низкое
более 4*106 МЕ/мл (2*106 копий/мл) высокое значение вирусной нагрузки
более 2*108 МЕ/мл (1*108 копий/мл) концентрация вирусной нагрузки выше линейного диапазона, значение виремии высокое

Количественный анализ ПРЦ может назначаться во время противовирусной терапии, на разных ее сроках. Как правило, это происходит на 1-й,4-й, 12-й и 14-й неделях.

Необходимо исследование, в данном случае, для понимания эффективности проводимого лечения, когда результат не оправдывает ожиданий, терапию корректируют и ждут следующего срока для проведения анализа.

В зависимости от стоимости исследования, оно может проводиться двумя способами:

  • недорогим Р-ДНК методом, который наиболее часто, собственно, и используется. Его недостаток в невысоком пороге чувствительности – искомый ген обнаруживается от 500 МЕ на мл крови;
  • более дорогостоящим ТМА способом, который позволяет обнаружить во взятой крови нуклеиновые кислоты вирусных клеток. Благодаря этому, его порог чувствительности начинается от 5-ти МЕ на мл. Его стоимость окупается в том плане, что ТМА диагностику достаточно провести единожды, в отличие от предыдущего метода, ведь чтобы получить достоверный результат необходимо повторять исследование.

Стоит принять во внимание, что по полученным данным исследования невозможно определить степень изменений, произошедших в печени. Эту информацию могут предоставить только биохимия, биопсия или эластометрия.

Общий анализ

Достоверность результатов, полученных от проведения любого лабораторного исследования, зависит в некоторой степени от подготовки самого пациента, и ПЦР анализ не исключение. Многие задаются вопросом о том, что такое подготовка к анализам.

Ответ прост — это комплекс мер, рекомендованных врачом и проводимых пациентом за некоторое время до предполагаемого забора биоматериала. Перед сдачей венозной крови для выявления вируса гепатита С человеку необходимо:

  • посетить лабораторию в утренние часы обязательно на голодный желудок (пищу допустимо принимать не позднее, чем за 8 часов до предполагаемого визита в лабораторию);
  • рекомендовано сократить объем или полностью отказаться на 8–10 часов от употребления всевозможных напитков (чай, кофе, сок), допускается только обычная вода без газа;
  • за 48 часов до забора крови необходимо обязательно отказаться от употребления алкогольных напитков, а также слишком жирной пищи;
  • лучше воздержаться от курения (минимум за несколько часов);
  • не рекомендуется сдавать кровь в один день вместе с другими медицинскими процедурами, например, ультразвуковой диагностикой, массажем, физиотерапией, флюорографией;
  • по возможности за 24 часа следует отказаться от приема каких-либо лекарственных препаратов (если они не являются жизненно важными для человека);
  • ближайшие 15 минут следует провести в спокойном состоянии, а для этого нужно прийти в процедурный кабинет немного пораньше назначенного времени.

Кроме всего вышеперечисленного, человеку лучше воздержаться от активной физической деятельности и от психоэмоциональных нагрузок.

Существуют некоторые исключения. Например, забор биоматериала можно делать в вечернее и дневное время. Только в этом случае принимать пищу запрещено ближайшие 5 часов перед проведением медицинской процедуры.

При выполнении общего анализа крови при гепатите С можно оценить состояние пациента. Изменения показателей крови не воспринимаются, как специфические симптомы гепатита, однако при данном заболевании происходят такие нарушения, как:

  • снижается концентрация гемоглобина, тромбоцитов и лейкоцитов;
  • повышается содержание лимфоцитов;
  • нарушается свертываемость крови;
  • увеличивается скорость оседания эритроцитов (СОЭ).

Если Вы хотите самостоятельно пройти данное исследование буду больным гепатитом С, то мы Вам все-таки рекомендуем посоветоваться с Вашим лечащим врачом, так как информативность вирусного показателя отмечается на 1,4,12 и 24 неделях болезни.

Благодаря такому диапазону можно проследить эффективность или неэффективность проводимого лечения. Установить график улучшения или ухудшения состояния больного способен только лечащий врач.

Поэтому доверьтесь всецело ему.

Данное исследование назначается врачом в случае положительного ответа при диагностике гепатита С. Как правило, оно назначается одновременно с анализом на определение генотипа вируса гепатита С.

О чем говорит расшифровка количественного анализа на гепатит С? В первую очередь, этот анализ говорит о том, насколько пациент инфицирован и, соответственно, заразен. Количественное определение вируса в крови позволяет также определить, насколько эффективна применяемая схема терапии.

Врачи назначают его после 4, 12 и 24 недель лечения. Снижение уровня вирусной нагрузки говорит о том, что терапия выбрана правильно.

Также анализ назначается после 24 недель от момента завершения терапии.

РНК (рибонуклеиновая кислота) — вид макромолекулы, одна из составляющих живой клетки. РНК отвечает за кодировку генетической информации. Вирус гепатита С содержит молекулу РНК и имеет обыкновение мутировать. Известны 6 его подтипов, а также много субтипов.

Болезнь в своей хронической стадии приводит к фиброзу печени — разрастаются соединительные ткани, структура органа постепенно нарушается. Фиброз поддается своевременному лечению, так как печень не подверглась еще разрушительным процессам.

В отличие от цирроза, тяжелого необратимого заболевания печени, в который может перерасти фиброз без принятия необходимых мер вовремя. .

Человеку с подозрением на наличие у него вируса гепатита, определяют антитела к нему. Если их нет — заболевание исключается, при их наличии прибегают к методу ПЦР (полимеразной цепной реакции).

В молекулярной биологии он является экспериментальным, но занимает ведущее место среди методик диагностирования инфекционных болезней. С помощью него можно значительно увеличить концентрацию фрагментов молекул в пробе.

Через 10 дней после инфицирования РНК уже возможно определить в крови.

Этот метод является единственным, позволяющим выявить заболевание на ранних стадиях. Другими способами (напр., биохимическим исследованием крови) это сделать невозможно, так как печень еще не поражена.

Открыл метод в 1993 году биохимик Кэрри Муллис, за что получил Нобелевскую премию. ПЦР стал прорывом в медицине и науке, так как позволил быстро и точно определять инфекции в крови и других биологических материалах человека. Иными словами, метод ускорил развитие диагностики инфекционных заболеваний.

РНК-анализ HCV RNA методом ПЦР является эффективным по следующим причинам:

  • имеет хорошую чувствительность — определяется даже малое количество вируса в крови;
  • определяется сам вирус, а не побочные продукты, создаваемые им;
  • определяется вид возбудителя.

После получения показателей количественного анализа необходимо сделать расшифровку результатов анализов на гепатит С. Результаты вычисляются и в единицах МЕ/мл, и в копиях на мл. Для получения результатов, пересчитанных в копии, применяют несколько методик.

В их числе:

  • HCV Monitor (коэффициент пересчета на МЕ — 2,7);
  • LCX HCV RNA (коэффициент пересчета на МЕ — 3,8).

Таблица. Расшифровка количественного анализа HCV RNA методом ПЦР.

Показатель, МЕ/мл Результаты обнаружения вируса
Не обнаружено Является нормой для здорового человека
Ниже 180 Минимальная концентрация ниже диапазона измерений, не обнаружен
Ниже 800 000 Обнаружен, виремия (концентрация вируса) низкая
Выше 800 000 Обнаружен, виремия высокая
Выше 25 000 000 Обнаружен, виремия выше диапазона измерений

Такая расшифровка результатов анализов на гепатит С помогает определить степень опасности заболевания в плане возможности его передачи. Чем больше обнаружена концентрация вируса в крови при расшифровке, тем выше вероятность заразить другого человека. Также концентрация влияет на успешность назначаемого лечения.

Нормальным результатом количественного анализа на гепатит С для здорового человека считается полное отсутствие вируса в крови. На это должен указать качественный анализ, он проводится пациентам, у которых обнаружены антитела к вирусу.

Если количественный анализ с расшифровкой показал результат меньше 400 тыс. МЕ/мл, можно говорить о минимальной концентрации вируса в крови, но не об отсутствии заболевания. Нагрузку более 800 тыс. МЕ/мл определяют как высокую.

Однако среди специалистов нет согласия в определении минимальной и максимальной концентраций. Границей считают 400 тыс. МЕ/мл.

Сдача анализов на гепатит с расшифровкой — надежный современный способ диагностики. Исследования проводятся до лечения, во время и после него, при наличии как острой, так и хронической форм заболевания. Диагностика, проведенная до терапии, определяет его эффективность в дальнейшем.

Во время лечения забор крови делают на 1-й, 4-й, 12-й и 24-й неделях. Уже на 12-й неделе показатель виремии должен значительно снизиться.

Если этого не происходит, лечение неэффективно и нужно подыскивать новое. Например, с 1 млн МЕ нагрузка должна уменьшиться до 100 тыс. МЕ.

После окончания лечения проводят расшифровку анализа гепатита С для исключения рецидивов.

Максимум через неделю у пациента окажутся результаты его теста на вирусную нагрузку. Если речь идет о больном, который проходит лечение от гепатита С, то следующий тест ему нужно сделать через месяц; единоразово лабораторный анализ такого типа проводится людям, в крови которых обнаружили антитела; и раз в год при наличии стабильного вирусного ответа.

По итогам разных анализов, результат может быть выдан в формате отрицательного или положительного ответа или с указанием конкретного количества РНК вируса.

Также врач может оставить запись «РНК обнаружены ниже диапазона измерений». Это означает, что РНК присутствуют у пациента, но их настолько мало, что используемый метод не смог показать конкретное количество (требуется дополнительная диагностика).

Количественные анализы хороши тем, что помогают врачам определять меру необходимости перехода на следующий этап терапии или надобность что-то в ней поменять. А также позволяют обнаружить людей, которые из-за высокого содержания в крови РНК вируса могут представлять опасность для окружающих.

Анализ сдается натощак, самой информативной является венозная кровь.

Иногда установленные результаты меняются в соответствии с тем, как хранили и обрабатывали забранную на анализ кровь. Особо стоит обратить внимание, что, одна и та же кровь может дать разные результаты в двух лабораториях.

В случае, когда кровь была загрязнена химическими или же белковыми соединениями, гепарином, хранилась ненадлежащим образом, анализ будет неточным или ошибочным.

Для того чтобы лечение по вирусной нагрузке было скорректировано правильно, необходимо периодически посещать лабораторию и сдавать кровь. Ведь именно снижение показателя в период проведения лечения свидетельствует об успешном применении препарата. В таком случае медики говорят, что терапевтический эффект привел к вирологическому ответу.

РНК может начать снижаться уже на третий день терапии, что оперативно покажет тест.

Считается, что терапия успешная, если на протяжении лечения показатель вирусной нагрузки снизился хотя бы на две единицы. Если уровень РНК остался на прежнем уровне или даже повысился, скорее всего используемый препарат не поможет избавиться от вирусного гепатита С.

Если вирусная нагрузка увеличилась по окончании курса лечения, то скорее всего речь идет о рецидиве. Именно поэтому люди, которые успешно побороли гепатит, должны в дальнейшем периодически сдавать анализ на вирусную нагрузку, чтобы следить за состоянием организма.

med-explorer.ru

Исследование для выявления возбудителя гепатита C (HCV), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется наличие генетического материала (РНК) вируса и его количество (вирусная нагрузка) в образце крови.

РНК HCV может быть обнаружена в концентрации, находящейся за нижней границей линейного диапазона концентраций. Линейный диапазон концентраций – это диапазон, в котором можно точно посчитать количество копий возбудителя.

Для данного анализа линейный диапазон концентраций ДНК HCV, определяемых детектирующим амплификатором, составляет 7,5×102 – 1,0×108копий/мл образца.

id=»subj2″>Синонимы русские

Вирус гепатита С (ВГС), количественное определение РНК.

Синонимы английские

Hepatitis C Virus RNA, Quantitative, Real-Time PCR, Blood, HCV Viral Load, Hepatitis C Virus RNA Quant.

id=»subj4″>Метод исследования

Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в режиме реального времени.

id=»subj6″>Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

id=»subj7″>Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

id=»subj9″>Общая информация об исследовании

Вирус гепатита С (HCV) – РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae, который поражает печень. Он способен размножаться в клетках крови (нейтрофилах, моноцитах и макрофагах, В-лимфоцитах) и вызывать криоглобулинемию, болезнь Шегрена и В-клеточные лимфопролиферативные заболевания.

HCV благодаря высокой мутационной активности способен избегать воздействия защитных механизмов иммунной системы. Существует 6 генотипов и множество субтипов вируса, которые имеют разные значения для прогноза развития заболевания и эффективности противовирусной терапии.

Основной путь передачи инфекции – через кровь (препараты для переливания элементов крови и плазмы, донорские органы, нестерильные шприцы, иглы, инструменты для татуирования, пирсинга). Вероятно заражение при половом контакте и ребенка от матери во время родов, но это случается нечасто.

Острый вирусный гепатит, как правило, характеризуется бессимптомным течением и остается невыявленным в большинстве случаев. Только у 15 % инфицированных заболевание протекает остро – с тошнотой, ломотой в теле, отсутствием аппетита и потерей веса (редко сопровождается желтухой).

У 60-85 % инфицированных развивается хроническая инфекция, что в 15 раз превышает частоту хронизации при гепатите В. Хронический вирусный гепатит С протекает с повышением печеночных ферментов и скудным проявлением симптомов.

У 20-30 % больных заболевание приводит к циррозу печени, увеличивая риск развития печеночной недостаточности и гепатоцеллюлярной карциномы.

Выявление РНК HCV свидетельствует о размножении вируса в организме и является методом диагностики заболевания. Генетический материал вируса можно обнаружить с помощью ПЦР через 10-12 дней после инфицирования – в этот период специфические антитела, которые образуются через несколько месяцев после заражения, отсутствуют и биохимические показатели функции печени находятся в пределах референсных значений.

Посредством ПЦР выявляют РНК вируса качественно или количественно. Благодаря качественному методу подтверждается присутствие вируса гепатита С и его активное размножение. Количественное определение вирусной нагрузки с учетом генотипа HCV позволяет контролировать проводимую терапию и прогнозировать течение болезни.

Эффективность лечения оценивается по количеству РНК до и во время терапии. Обычно вирусная нагрузка крови снижается в несколько раз за первые три месяца успешного лечения.

При эффективной терапии виремия уменьшается на два порядка в первые 4-12 недель лечения и после окончания курса терапии генетический материал вируса в крови не обнаруживается.

Отсутствие снижения виремии через 12 недель с начала лечения указывает на его неэффективность. Рекомендовано проводить анализ до начала терапии, на 4-й, 12-й и 24-й неделях лечения и через 24 недели после окончания курса.

Длительность терапии и периодичность количественного определения РНК вируса гепатита С зависит от генотипа вируса и степени повреждения печени.

id=»subj10″>Для чего используется исследование?

  • Для подтверждения диагноза «вирусный гепатит С».
  • Для прогнозирования течения вирусного гепатита С.
  • Для мониторинга противовирусной терапии и решения вопроса о дальнейшей тактике лечения.

id=»subj11″>Когда назначается исследование?

  • При качественном обнаружении РНК вируса гепатита С.
  • При остром и хроническом вирусном гепатите С.
  • При микст-гепатитах.
  • При планировании, во время и после окончания противовирусной терапии.

id=»subj12″>Что означают результаты?

  • Не обнаружено – РНК вируса гепатита С не обнаружена или значение ниже предела чувствительности метода (200 копий/мл = 400 МЕ/мл).

Что показывает анализ ПЦР на гепатит С? Как его сдавать?

Для постановки диагноза «хронический вирусный гепатит С (ХВГС)» требуется комплексное обследование человека, которое включает клинические, лабораторные и инструментальные исследования. Важным с точки зрения диагностики для постановки правильного диагноза является метод ПЦР – полимеразная цепная реакция.

Содержание Что показывает этот анализ и зачем он нужен? Три вида ПЦР анализов Как сдавать анализ ПЦР на гепатит С? Результат анализа ПЦР на гепатит С

Что показывает этот анализ и зачем он нужен?

Этим лабораторным методом обнаруживают РНК вируса гепатита С в крови человека. Вместе с иммуноферментным анализом (ИФА) на антитела к вирусу, ПЦР используют для постановки диагноза ХВГС и генотипа его возбудителя. Это исследование является одним из новейших методов лабораторной диагностики. Его достоверность при ХВГС превышает 97%, что считается очень хорошим показателем для исследований.

Существует три ПЦР анализа крови при ХВГС: качественный, количественный и генотипирование вируса. Первое исследование (качественный анализ) на вирус обнаруживает его в крови, поэтому используется только для постановки диагноза.

Второе (количественное) исследование определяет степень вирусной нагрузки на организм, поэтому применяется для контроля эффективности терапии.

Третий ПЦР (генотипирование) уточняет диагноз, устанавливая генотип вируса, что очень важно для назначения правильного противовирусного лечения.

Суть методики полимеразной цепной реакции заключается в использовании ферментов, которые многократно размножают генетический материал возбудителя в биоматериале. В процессе такой репликации пробирку с кровью несколько раз подогревают и охлаждают до температуры, необходимой для ускорения ферментативной реакции. В результате этих манипуляций количество вирусного генома многократно увеличивается, что позволяет его выявить даже при минимальном количестве.

ПЦР диагностика имеет много преимуществ перед другими лабораторными исследованиями:

  • высокая чувствительность – 97-98%;
  • гарантированная аналитическая специфичность (выявляет именно тот возбудитель, который требуется найти, а не его родственный штамм);
  • быстрота проведения (требуется не более 2 суток для получения заключения).

Три вида ПЦР анализов

Качественный ПЦР анализ назначается всем пациентам, у кого ИФА-анализом были выявлены антитела к вирусу ХВГС. После проведения качественного ПЦР может быть получено два варианта ответа: «РНК обнаружено» или «РНК не обнаружено». Чтобы обнаружить в крови минимальное количество вируса, необходимы тест-системы с чувствительностью не менее 50 МЕ/мл. Если концентрация вируса в крови больного будет меньше, чем может определить диагностикум, то результат исследования может быть и ложноотрицательным. Чтобы избежать такой диагностической ошибки, лаборатории, осуществляющие ПЦР-диагностику, должны быть обеспечены высокочувствительными тест-системами. В лаборатории «Инвитро», к примеру, используются тесты с чувствительностью от 15 МЕ/мл. Информацию о чувствительности тестов работники лаборатории обязаны предоставлять пациентам и врачам по их первому требованию.

Количественный анализ ПЦР определяет степень виремии, то есть  концентрацию возбудителя в крови, вирусную нагрузку. Результат этого исследования, в отличие от качественного ПЦР, выражается цифрами, например, 2×10*6 МЕ/мл, что означает 2 миллиона международных единиц в 1 мл крови. Часть лабораторий применяет другой показатель – число копий/мл. Эти два показателя легко конвертировать: 1 международная единица равна 4 копиям РНК. Таким образом, 2×10*6 МЕ/мл будет означать, что в крови больного обнаружено 8×10*6 копий вирусной РНК в 1 мл, т.е. 8 млн. копий в 1мл крови.

Генотипирование – это определение одного из шести генотипов вируса. От генотипа возбудителя зависит клиническая картина, скорость развития осложнений со стороны печени и прогноз для дальнейшей жизни пациента. Генотип вируса очень важен уже на стадии постановки диагноза, поскольку от его правильного определения зависит комбинация препаратов и длительность терапевтического курса, который будет назначен больному.

Однако даже такое казалось бы «идеальное» лабораторное исследование имеет свои минусы:

  • в ходе исследования происходит репликация генетического материала всех возбудителей, даже неживых, что может исказить результат. Поэтому для осуществления контроля эффективности с помощью ПЦР повторный анализ проводят не ранее, чем через 2 месяца после предыдущего, чтобы погибшие вирусы успели «покинуть» организм больного;
  • часть вирусного генома, который определяют с помощью тест-систем, теоретически может присутствовать и в других вирусах или микроорганизмах, поэтому есть вероятность ложноположительного ответа;
  • вирусы быстро мутируют. Иногда скорость и степень мутирования вируса настолько высока, что тест-система перестает улавливать их геном. Как следствие, возможен ложноотрицательный результат.

Для нивелирования этих недостатков, производители лабораторных тест-систем для ПЦР диагностики постоянно проводят их испытания, в том числе на перекрестные реакции и на чувствительность к тому или иному генотипу вируса.

Как сдавать анализ ПЦР на гепатит С?

Чтобы заключение обследования методом ПЦР были достоверными, необходимо строго соблюдать правила подготовки к его проведению:

  • исследование проводится на голодный желудок (глюкоза, жиры, минералы, попадающие в кровь из пищи, могут повлиять на скорость и качество ферментной реакции);
  • разрыв между последним приемом пищи и отбором крови для анализа должен составлять не менее 8 часов;
  • накануне исследования запрещено принимать алкоголь и употреблять жирную пищу, период выведения которых затяжной;
  • за сутки до похода в лабораторию следует избегать сильных физических и эмоциональных нагрузок;
  • до момента забора крови не рекомендуется курить.

Чтобы избежать появления ложных заключений, предполагаемому больному необходимо прийти в лабораторию немного раньше, чем будет проведен забор крови. Нужно 15-20 минут для того, чтобы человек отдышался, успокоился. Адреналин, присутствующий в крови после быстрой ходьбы, может повлиять на результат обследования.

Если направляемый на анализ пациент принимает какие-либо лекарственные препараты, об этом он должен уведомить врача. Вполне возможно, что от приема некоторых из них придется на некоторое время отказаться (если это возможно).

Результат анализа ПЦР на гепатит С

Расшифровкой результатов занимается врач-лаборант той лаборатории, которая проводила анализ. Расшифровка – это определение отклонения полученного результата от нормы. Норма показателей устанавливается непосредственно производителем тест-системы, которая используется лабораторией для диагностики. Поэтому не стоит удивляться, что в одних лабораториях вирусную нагрузку определяют в МЕ/мл, а в других – в копиях/мл.

Получив заключение, его нужно уметь правильно трактовать. Трактовкой результатов исследования должен заниматься лечащий врач больного гепатитом С. Только после объективного, инструментального и лабораторного обследования пациента, врач может получить достаточное количество данных для грамотной трактовки полученных результатов ПЦР.

Оценка качественного анализа, как правило, не вызывает затруднений, даже у пациентов. Результат там может быть только один: «обнаружен» или «не обнаружен». При этом второй из них является нормой.

Показатели количественного анализа трактовать сложнее. Он показывает степень вирусной нагрузки на пациента. Даже среди гепатологов нет единого мнения по поводу того, как трактовать обнаруженную виремию. Большинство врачей склоняются к тому, что высокой нужно считать нагрузку более 8×10*5 МЕ/мл. Очень высокой считается нагрузка более 1×10*7 МЕ/мл, а низкой – менее 4×10*5 МЕ/мл.

Степень вирусной нагрузки говорит о вирулентности (агрессивности) вируса: чем больше его количество в крови, тем быстрее могут развиваться осложнения со стороны печени. Высокая концентрация вируса в крови беременной женщины повышает вероятность его проникновения через гематоплацентарный барьер к плоду. Виремия также влияет на эффективность лечения: при низких цифрах результативность терапии выше, чем при высоких.

Для того, чтобы быть уверенным в достоверности проведенного анализа ПЦР на гепатит С, нужно отдавать предпочтение только тем лабораториям, которые хорошо себя зарекомендовали. Ценовая политика при этом не должна играть первостепенную роль.

ПЦР-исследование на гепатит С: виды, показания, расшифровка

Вирусный гепатит С — тяжелое заболевание, которое протекает с поражением печени. У восьмидесяти процентов больных оно переходит в хроническую форму. Вирус размножается в клетках печени — гепатоцитах — и вызывает их гибель. Отмершая ткань замещается очагами соединительной ткани, развивается фиброз.

По мере развития фиброза печень оказывается неспособна выполнять свои функции, начинается цирроз печени, который опасен своими осложнениями: повышением давления в системе портальной вены, желудочно-кишечными кровотечениями, нарушением свертывания крови, изменениями психики из-за повреждения ядер головного мозга токсическими продуктами.

Причина заболевания — заражение вирусом из семейства Flaviviridae, который относится к типу РНК-вирусов. Это значит, что генетический материал, по которому синтезируются белки возбудителя, закодирован в молекуле рибонуклеиновой кислоты. Заражение происходит через кровь, половым путем, и от беременной женщины к плоду. К сожалению, между инфицированием и началом выработки антител может пройти достаточно большое количество времени — от двух недель до шести месяцев. Это не дает определить заражение методом иммуноферментного анализа и начать лечение на ранних стадиях.

Что такое анализ ПЦР?

ПЦР — метод молекулярного анализа, который позволяет обнаружить генетический материал возбудителя уже на первой неделе после инфицирования с помощью полимеразной цепной реакции. Исследование обладает высокой специфичностью, точностью, и позволяет не только определить наличие или отсутствие вируса, но и его концентрацию и генотип.

Для исследования берут кровь пациента, в которой потенциально может находиться РНК вируса. В кровь добавляют праймеры — искусственно синтезированные участки искомого гена малой длины, и РНК-полимеразу — специальный фермент, который многократно увеличивает количество генетического материала возбудителя. С помощью специального аппарата проводят несколько циклов нагревания и охлаждения. Затем материал анализируют и сопоставляют с известными генами вируса, на основе чего делают заключение о наличии или отсутствии заражения.

Виды ПЦР-анализа на гепатит С

Различают три вида ПЦР-анализа:

  1. Качественный анализ ПЦР. Первая стадия исследования. Он позволяет выявить генетический материал вируса в крови.
  2. Количественный анализ ПЦР. Позволяет определить вирусную нагрузку — концентрацию генетического материала возбудителя в одном миллилитре крови. Это исследование проводят перед началом терапии, а затем на первой, четвертой, двенадцатой и (если курс длительный) двадцать четвертой неделе лечения, чтобы оценить его эффективность.
  3. Генотипирование. Возбудитель гепатита С часто и быстро мутирует. На планете было обнаружено семь вариантов генотипа этого вируса. В России распространены первой, второй и третий тип. Каждый из генотипов обладает различной устойчивостью к терапии, например эффективность лечения первого типа составляет шестьдесят процентов, а для второго и третьего этот показатель достигает восьмидесяти пяти. Поэтому, для того чтобы подобрать подходящие препараты и назначить курс лечения достаточной длительности необходимо точно определить, каким типом вируса заражен пациент.

Показания к ПЦР-анализу на гепатит С

ПЦР-исследование назначают в следующих случаях:

  • контакт с больным человеком, при котором могло произойти заражение;
  • положительный результат иммуноферментного анализа;
  • признаки цирроза печени: изменение размеров печени, увеличение селезенки, появление на животе подкожного венозного сплетения;
  • появление симптомов поражения печени: боли в правой части живота, пожелтение кожных покровов;
  • повышение активности АЛТ и АСТ в биохимическом анализе крови;
  • перед началом лечения для определения вирусной нагрузки;
  • с целью контроля за эффективностью антивирусной терапии;
  • после окончания лечения для контроля за рецидивами;
  • при наличии диагностированного гепатита B, для исключения смешанного поражения печени.

Расшифровка ПЦР-исследования на гепатит С

Расшифровкой ПЦР-анализа и иммуноферментного анализа на гепатит С должен заниматься гепатолог или инфекционист. Анализировать результаты ПЦР необходимо в комплексе с данными биохимического анализа крови, биопсии и УЗИ. Только квалифицированный врач сможет проанализировать результаты исследований и, основываясь на них, назначить правильное лечение.

Обнаружено

В анализируемом биологическом материале обнаружен генетический материал возбудителя. Инфицирование подтверждено.

Не обнаружено

Инфицирование отсутствует, либо количество РНК возбудителя ниже границы чувствительности.

Не обнаружено

Нормальный показатель для здоровых людей. Означает, что в исследуемом материале отсутствует РНК гепатита С, либо его концентрация ниже порога чувствительности исследования.

До 1,8*10^2 МЕ/мл

Концентрация РНК ниже диапазона количественного определения. Такие результаты интерпретируют очень осторожно, соотносят их с данными других исследований, часто проводят повторное исследование.

До 8*10^5 МЕ/мл

Уровень вирусной нагрузки при данной концентрации считается низким. Обычно снижение количества вируса означает, что терапия идет успешно.

Больше 8*10^5 МЕ/мл

Уровень вирусной нагрузки при данной концентрации считается высоким.

Больше 2,4*10^7 МЕ/мл

Количество РНК выше верхнего предела диапазона количественного определения. Делать выводы о степени вирусной нагрузки при таком результате нельзя. Обычно в таких случаях тест повторяют с разведением образца крови.

Обнаружена РНК определенного генотипа

В биоматериале обнаружен вирус гепатита С определенного генотипа и субтипа. Результат кодируется римскими цифрами и латинскими буквами, например — 1а, 2b. Всего существует семь генотипов и шестьдесят семь субтипов, однако в России встречаются только три первых типа.

Обнаружена РНК вируса гепатита С

В крови обнаружена РНК редкого для России генотипа, который нельзя отнести к первому, второму или третьему типу. Необходимы дополнительные исследования.

Не обнаружено

Данный результат говорит о том, что пациент здоров, или о том, что колчество РНК возбудителя слишком мала.

Возможна ситуация, когда ПЦР-анализ на гепатит С отрицательный, а иммуноферментный анализ распознает антитела против вируса. Это значит, что пациент переболел гепатитом С в острой форме и излечился самостоятельно. Примерно двадцать случаев инфицирования заканчиваются самопроизвольным излечением, если организм пациента оказывает достаточное сопротивление инфекции.

Несмотря на то, что ПЦР — высокоточный анализ, его результаты могут быть искажены в следующих ситуациях:

  • кровь транспортировалась в лабораторию в ненадлежащих условиях, был нарушен температурный режим;
  • образец биоматериала был загрязнен;
  • в крови находились остаточные следы гепарина и других антикоагулянтов;
  • в исследуемом веществе оказались ингибиторы — вещества, которые замедляют или останавливают полимеразную цепную реакцию.

Преимущества ПЦР перед другими методами

  1. Диагностика на ранних стадиях. ПЦР обнаруживает генетический материал возбудителя заболевания. С помощью иммунофлюоресцентного анализа можно определить только иммуноглобулины — вещества, которые организм вырабатывает в ответ на инфекцию. В случае заражения гепатитом С промежуток между заражением и началом иммунного ответа может составлять несколько недель и месяцев, в это время ИФА будет неэффективна. ПЦР даст ответ уже на первой неделе после заражения.
  2. Низкая вероятность ошибки. В исследуемом материале определяют участок генетического материала, который характерен только для одного вида возбудителей. Это позволяет исключить ложные результаты. При ИФА возможны ошибки, так как один и тот же вид антител может выделяться против разных вирусов — такие антитела называют перекрестными.
  3. Высокая чувствительность. ПЦР позволяет обнаружить РНК возбудителя даже в минимальных количествах. Это дает возможность выявить скрытые инфекции.

Как подготовиться к сдаче крови для ПЦР-исследования

Для ПЦР-анализа на гепатит С собирают венозную кровь. Обычно из вены пациента за один раз берут две порции крови: первую отправляют на ПЦР, а вторую на ИФА. Это делают для того чтобы более точно оценить, насколько сильно пациент заражен вирусом, и как иммунитет борется с ним.

Обычно от пациента требуют соблюдения следующих правил:

  • анализ крови сдают с утра;
  • перерыв между последним приемом пищи и сдачей крови должен составлять восемь-десять часов;
  • за два-три дня до анализа нужно отказаться от жареной и жирной пищи, и алкоголя;
  • в течение двадцати четырех часов перед анализом пациент должен избегать физических нагрузок: не переносить тяжестей, не посещать спортзал или бассейн.

Качественный анализ ПЦР на гепатит С

Гепатит – серьезное заболевание, которое имеет множество причин для возникновения. В основе его развития лежит прямое или опосредованное поражение печени. Учитывая ее важность для всего организма, можно только догадываться, насколько тяжело протекает патология. В этой статье более подробно разберем особенности течения и лабораторную диагностику гепатита С.

Причиной болезни является вирусный агент, который относится к РНК-содержащим возбудителям. Он имеет отличительную черту – способность мутировать, то есть изменять свою структуру. Благодаря этому инфекция ускользает от атаки иммунной системы и в большинстве случаев приводит к хронизации воспалительного процесса в печени.

Учитывая существование различных подтипов вируса, подбор лекарственных средств должен проводиться с учетом результатов генотипирования. Несмотря на длительное изучение болезни и особенностей строения HCV, до сих пор не удалось разработать специфическую прививку от заболевания.

Трудности ранней диагностики заключаются в бессимптомном течении гепатита, вследствие чего человек обращается к врачу на стадии цирроза. Чтобы вовремя обнаружить заболевание, требуется регулярное проведение медосмотров. Только путем лабораторного исследования крови удается выявить HCV и предупредить заражение окружающих. Дело в том, что носитель инфекции может длительное время не догадываться о патологии и продолжать передавать вирус здоровым людям.

Пути передачи

Вирус в большинстве случаев распространяется через кровь, так как в ней содержится наибольшая концентрация патогенных агентов. Таким образом, инфекция передается:

  • при гемодиализе;
  • при уколе зараженной иглой;
  • в процессе драки, когда травмируются кожные покровы, и происходит гемоконтакт;
  • при гемотрансфузии (переливании крови).

Вероятность заражения при интимной близости незначительная, так как в сперме и выделениях из влагалища содержится небольшое количество возбудителей. Риск инфицирования существенно увеличивается при нарушении целостности слизистой гениталий. Такое наблюдается при агрессивном и анальном сексе.

Что касается вертикального способа передачи инфекции, то он осуществляется в процессе родовой деятельности. В периоде вынашивания плода возбудитель не может проникнуть через плаценту к эмбриону. При естественных родах патогенный агент передается ребенку при травмировании его кожи, когда наблюдается контакт с кровью матери.

После проникновения возбудителя в здоровый организм начинается синтез антител, которые являются защитой от инфекции и относятся к иммунным структурам. Именно они обнаруживаются при первичном исследовании человека с помощью ИФА.

Для подтверждения диагноза пациенту проводится полимеразная цепная реакция. Она представляет собой анализ на выявление генетического материала патогенного агента и определение вирусной нагрузки.

Лабораторная диагностика гепатита С

Лабораторная диагностика начинается с проведения иммуноферментного анализа. Основная его задача заключается в обнаружении антител, вырабатывающихся против возбудителя. Его эффективность – почти 95%. Благодаря этому исследованию на доклинической стадии удается выявить вирусоносителя и направить его на дальнейшее обследование.

Качественный анализ ИФА указывает на наличие или отсутствие иммуноглобулинов в крови пациента. Его результат может быть «положительный» или «отрицательный». Получив первый вариант ответа, человек направляется на следующее обследование – ПЦР. Его цена зависит от качества реактивов и лаборатории. Стоимость полимеразной цепной реакции может достигать 4 тысяч рублей.

Только путем комплексного обследования удается своевременно и точно поставить диагноз, а также определить дальнейшую лечебную тактику.

С помощью полимеразной цепной реакции даже небольшой объем биологического материала позволяет оценить вирусную нагрузку в крови, то есть подсчитать концентрацию возбудителей в одном миллилитре жидкости.

С появлением ПЦР диагностика гепатита значительно упростилась. Анализ дает возможность выявить РНК HCV, установить стадию инфекционного процесса и заразность вирусоносителя.

Существует несколько разновидностей генетической диагностики:

  1. качественный анализ ПЦР на гепатит С – подтверждает факт наличия или отсутствия HCV в крови обследуемого:
  2. количественный, благодаря которому можно подсчитать концентрацию вирусов и установить стадию болезни. Результат выдается в МЕ/мл или копии/мл (в зависимости от лаборатории);
  3. генотипирование – необходимо для определения генотипа HCV. Это требуется для точного подбора лекарственных средств, которые будут максимально эффективны в данном случае. Анализ косвенно указывает на тяжесть патологического процесса в печени. Так, при третьем генотипе возбудителя чаще всего наблюдается стеатоз, в основе развития которого лежит накопление жира в гепатоцитах (ее клетках). Помимо этого, тип вируса влияет на результат и продолжительность терапевтического курса.

Первым делом в лаборатории биологический материал исследуется на наличие РНК HCV. Важно помнить, что качественный анализ на гепатит С имеет определенный уровень чувствительности, в связи с чем не всегда может давать верный ответ. В таком случае рекомендуется повторное проведение лабораторной диагностики с применением других реактивов.

Для получения достоверных результатов следует использовать тест-системы с чувствительностью – не ниже 50 МЕ/мл.

Результат диагностики может быть как «положительный», так и «отрицательный». Если возбудитель не найден в крови, исследование завершается. При выявлении патогенного агента в образце далее проводится количественный подсчет вирусной нагрузки.

Ложноотрицательный ответ получается, когда нарушается технологический процесс, например, в среду попадают активные компоненты, угнетающие построение копий возбудителя. Таким образом не удается отобразить истинную картину крови, из-за чего инфицирование человека не диагностируется.

Ложноположительный результат можно получить, если пробирка для забора биологического материала, а также среда для проведения исследования были загрязнены. Помимо этого, такой ответ анализа возможен при микст-инфекции, когда печень поражается несколькими вирусами, например, гепатитом С и D.

Показания для качественного исследования

Врач может назначать пациенту качественное исследование на выявление РНК вируса гепатита С:

  • при получении положительного или сомнительного ответа иммуноферментной диагностики;
  • для верификации диагноза;
  • определения вирусной нагрузки;
  • постановки стадии заболевания;
  • диагностики микст-инфекции. Зачастую гепатит С поражает печень одновременно с вирусом «D»;
  • определения терапевтической тактики с учетом генотипа возбудителя;
  • оценки динамики изменений на фоне лечения противовирусными медикаментами.

К преимуществам полимеразной цепной реакции относится:

  1. высокая чувствительность методики, что позволяет установить факт инфицирования на доклинической стадии;
  2. выявление генетического материала возбудителя, а не антител к нему;
  3. возможность установления субтипа патогенного агента;
  4. высокая скорость диагностики, так как не требуется посев материала на питательную среду, а достаточно использовать специфические тест-системы. Человек получает результат спустя 5 часов;
  5. универсальность. Анализ позволяет выявить любой генетический материал (РНК, ДНК). Благодаря этому врач может подтвердить гепатит С и другие виды болезни (В);
  6. возможность выявления скрытой инфекции.

Количественное исследование

При исследовании крови с помощью полимеразной цепной реакции удается подсчитать количество возбудителей в фиксированном объеме биологического материала. Показатель представлен в МЕ/мл. Благодаря анализу можно установить степень заразности пациента, определить стадию инфекционного процесса, а также оценить эффективность лекарственной терапии.

На основании ПЦР специалист решает, какие дозы медикаментов позволяют блокировать размножение возбудителей. Кроме того, определяется длительность противовирусного лечения и прогноз для жизни. Важно помнить, что тест-системы имеют высокую чувствительность, поэтому метод дает возможность подтвердить инфицирование человека еще на доклинической стадии.

Генотипирование

Учитывая способность возбудителя мутировать, для определения тактики лечения и выбора противовирусных лекарств необходим его генотип. Например, лечение гепатита HCV 1 длится 48 недель, при этом положительная динамика отмечается лишь в 60% случаев. Генотипы 2 и 3 имеют более благоприятный прогноз. Противовирусные лекарства назначаются на 8 месяцев, а их эффективность достигает 85%.

Согласно статистическим данным, в большинстве случаев на территории Российской Федерации регистрируется HCV 1, 2 и 3.

При расшифровке лабораторного исследования может быть указан такой ответ – «не типируется». Это значит, что в кровеносной системе больного циркулирует вирус, которого не удается распознать тест-системой. Результат анализа в данном случае свидетельствует о заражении человека нетипичным для данной географической зоны возбудителем.

Как получить достоверные результаты?

Чтобы качественное исследование ПЦР по выявлению РНК возбудителя гепатита С показало правильные результаты, необходимо соблюдать требования по подготовке к лабораторной диагностике:

  1. забор крови осуществляется натощак, причем «голодный» промежуток не должен быть короче 8-ми часов;
  2. за два дня до исследования рекомендуется прекратить распитие спиртных напитков и отказаться от острых, жирных и копченых блюд;
  3. отменить введение лекарственных средств, снижающих свертываемость крови, например, гепарина. Если данные медикаменты назначены по жизненным показаниям, необходимо предупредить об этом врача. Кроме того, специалист должен знать о приеме других препаратов, которые могут повлиять на результат лабораторного исследования;
  4. накануне забора биологического материала не следует проводить физиотерапевтические процедуры и подвергать себя тяжелой физической нагрузке.

На результаты анализа может влиять не только человек, сдающий кровь, но и другие факторы, а именно:

  • некачественный забор крови;
  • несоблюдение рекомендаций по транспортировке биологического материала;
  • недостаточная профессиональная подготовка работников лаборатории;
  • несоблюдение техники проведения исследования;
  • введение антикоагулянтов (гепарина) накануне забора крови. Данная группа лекарств снижает свертываемость, тем самым замедляя работу реактивов.

В разных лабораториях ответ диагностики может несколько отличаться, однако эти погрешности не влияют на конечный результат исследования.

Особое внимание уделяется видам тест-систем, которые используются в лаборатории. Зачастую предпочтение отдается реактивам с высокой чувствительностью. Это важно для пациентов с низкой вирусной нагрузкой, поскольку ее сложно обнаружить.

Как часто проводится лабораторное исследование?

Первично полимеразная цепная реакция проводится людям, у которых при иммуноферментном анализе были выявлены антитела к возбудителю гепатита. В данном случае она назначается для подтверждения факта заражения человека и установления стадии болезни. Кроме того, анализ позволяет определить субтип вируса, что особенно важно для выбора лекарственных средств.

Следующим периодом для обязательного лабораторного исследования является 3 месяца от начала противовирусной терапии. Диагностика дает возможность оценить эффективность медикаментов, откорректировать дозу или заменить их.

Помимо основных анализов, ПЦР может дополнительно проводиться на 4 и 24 неделях от начала лечения. Положительный прогноз болезни подтверждается уменьшением вирусной нагрузки по истечении трех месяцев терапии. Так, например, она должна снизиться с 1 миллиона МЕ/мл до нескольких сотен тысяч.

Если концентрация патогенных агентов в крови остается на прежнем уровне или несколько нарастает, это указывает на неэффективность противовирусных средств и требует их замены. С помощью ПЦР в конце лечения удается подтвердить выздоровление пациента.

Чтобы правильно трактовать результаты лабораторной диагностики, требуется консультация гепатолога или инфекциониста. Учитывая большую частоту ложных ответов при ИФА, анализ используют исключительно для первичного скрининга. Для более тщательного обследования пациента применяется полимеразная цепная реакция.

Автор: Светлана Галактионова

Смотрите также